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ELISA試劑盒、人ELISA試劑盒、大鼠ELISA試劑盒、小鼠ELISA試劑盒、生物試劑、抗體、血清、進口標(biāo)準(zhǔn)品、微生物培養(yǎng)基
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小鼠胰島素ELISA試劑盒方法

點擊次數(shù):15206   發(fā)布時間:2013/7/18 8:42:52

小鼠胰島素elisa試劑盒實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠胰島素(Insulin)水平。用純化的小鼠胰島素(Insulin)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入胰島素(Insulin),再與HRP標(biāo)記的胰島素(Insulin)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素(Insulin)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠胰島素(Insulin)濃度。

 

小鼠胰島素ELISA試劑盒操作步驟
1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

800pg/ml
5號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
400pg/ml
4號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200pg/ml
3號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100pg/ml
2號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50pg/ml
1號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 
2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
小鼠胰島素ELISA試劑盒注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
       6.底物請避光保存。
       7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
       9.本試劑不同批號組分不得混用。
      10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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