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討論ELISA試劑盒實驗中的顯色問題

點擊次數(shù)：14820 發(fā)布時間：2015/7/20 14:21:48

elisa試劑盒試驗中顯色是ELISA中的*后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的產物。上海恒遠在此和你一起討論ELISA試劑盒實驗中的顯色問題。
試驗中反應的溫度和時間是影響顯色的因素。在一定時間內，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間，及時判斷。

OPD 底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30 分鐘后即不再加深，再延長反應時間，可使本底值增高。OPD 底物液受光照會自行變色，顯色反應應避光進行，顯色反應結束時加入終止液終止反應。OPD 產物用硫酸終止后，顯色由橙黃色轉向棕黃色。

TMB 受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應觀察結果。但為保證實驗結果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當時間閱讀結果。T MB 經(jīng)HRP 作用后，約40 分鐘顯色達頂峰，隨即逐漸減弱，至2 小時后即可完全消退至無色。TMB 的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24 小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。

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原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術發(fā)展有限公司