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技術(shù)文章

ELISA實(shí)驗(yàn)“顯色淡，靈敏度偏低”原因何在？

點(diǎn)擊次數(shù)：14792 發(fā)布時(shí)間：2015/10/10 8:50:26

在elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)中，常會(huì)遇到elisa試劑盒顯色淡靈敏度偏低的問題，ELISA實(shí)驗(yàn)“顯色淡，靈敏度偏低”原因何在？以下是上海恒遠(yuǎn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員根據(jù)不同問題可能原因及其防止方法的整理：
可能原因及防止方法：
1．孵育反應(yīng)時(shí)間不足
定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)
2．洗滌時(shí)沖擊力太大，洗滌液浸泡時(shí)間太長，洗滌次數(shù)增加
減少洗滌沖擊力，按說明書要求保留洗滌時(shí)間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)
3．試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長，溫度太高
試劑盒置保溫箱內(nèi)運(yùn)輸，并放足夠數(shù)量的冰塊，盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間
4．顯色劑滴加量不足或順序顛倒，或混合后加入
滴加顯色液時(shí)，滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，反加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入
5．顯色劑反應(yīng)時(shí)間不足
準(zhǔn)確定時(shí)
6．蒸餾水水質(zhì)有問題
測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響
7．樣品和NaN 3 防腐，抑制了酶的反應(yīng)
樣品不能加 NaN 3 防腐
8．試劑、樣品用前未能平衡
用前試劑、樣品置室溫平衡 30分鐘左右。
9．試劑盒超過有效期
超過效期試劑盒不要使用
10．試劑開啟時(shí)間過長長菌
試劑開啟后請盡量在短時(shí)間內(nèi)用完
11．恒溫箱溫度不足37℃或水浴鍋水溫度不足37℃）
放入反應(yīng)板時(shí)注意培養(yǎng)箱溫度，及時(shí)調(diào)整，孵育反應(yīng)期間開啟不宜太多，影響溫度平衡。
12．移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸頭內(nèi)壁掛液太多或內(nèi)壁不清潔
校正移液器，吸頭要配套，每次裝吸頭要吻合緊密。移液不宜過快，排放應(yīng)完全。吸頭內(nèi)壁要清潔，一次性使用。
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原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司