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BIM試劑盒分享實(shí)驗(yàn)技巧:ELISA（雙抗體夾心法）檢測(cè)HBsAg

點(diǎn)擊次數(shù)：14911 發(fā)布時(shí)間：2016/10/27 9:08:29

以已知抗體(抗HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入，共同孵育后，抗原結(jié)合于包被抗體上，再加入酶標(biāo)記特異抗體(酶標(biāo)抗HBs)，酶標(biāo)抗體連接到抗原上，*后加入底物溶液，根據(jù)顏色反應(yīng)來(lái)判定抗原含量。

HBsAg試劑盒，本試劑盒含：

名稱	96孔配置	48孔配置	備注
微孔酶標(biāo)板	8孔×12條	8孔×6條	無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品	0.3mL*6管	0.3mL*6管	無(wú)
樣本稀釋液	6mL	3mL	無(wú)
檢測(cè)抗體-HRP	10mL	5mL	無(wú)
20×洗滌緩沖液	25mL	15mL	按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A	6mL	3mL	無(wú)
底物B	6mL	3mL	無(wú)
終止液	6mL	3mL	無(wú)
封板膜	2張	2張	無(wú)
說(shuō)明書(shū)	1份	1份	無(wú)
自封袋	1個(gè)	1個(gè)	無(wú)

方法：
1、加入待測(cè)標(biāo)本每孔0.05ml，并設(shè)HBsAg陽(yáng)性對(duì)照2孔，HBsAg陰性對(duì)照2孔，空白對(duì)照1孔，然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml、空白對(duì)照孔不加)，充分混勻后置37℃孵育30分鐘。
2、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體、拍干、用洗滌液注滿每孔，棄去拍干，反復(fù)五次后拍干。
3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml)，然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml)，混勻，37℃孵育10分鐘。
4、每孔加終止液1滴(0.05ml)，混勻。

結(jié)果：
比色法:波長(zhǎng)450nm，先用空白孔校零點(diǎn)，然后讀取各孔光密度值。
樣品OD值/陰性對(duì)照平均OD值≥ 2.1判斷為陽(yáng)性，否則為陰性。
備注：陰性對(duì)照平均OD值低于0.05作0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。陽(yáng)性對(duì)照OD值≥0.8，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效。

注意事項(xiàng)：
1、試劑盒置2℃～8℃保存。
2、使用前試劑應(yīng)搖勻，并棄去1～2滴后垂直滴加。
3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測(cè)標(biāo)本所需微孔條，置室溫平衡30分鐘后再行測(cè)試，余者應(yīng)及時(shí)封存于冰箱中以備后用。
4、待測(cè)標(biāo)本不可用NaN3防腐。
5、不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。
6、結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。
7、若濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶時(shí)，請(qǐng)置37℃至溶解。