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酶聯(lián)免疫試劑盒靈敏度對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響

點(diǎn)擊次數(shù)：14738 發(fā)布時(shí)間：2016/11/1 9:46:15

酶聯(lián)免疫試劑盒敏度高是一大利益，而這本來(lái)也是和查看樣本有些有關(guān)的，假設(shè)待測(cè)樣本中政策蛋白的濃度對(duì)比高，則對(duì)靈敏度懇求相對(duì)小一些。假設(shè)待測(cè)樣本中政策蛋白的濃度對(duì)比低，則有必要考慮靈敏度的疑問。
一般來(lái)說(shuō)，試劑盒曲線上的*小濃度是對(duì)比精確的，低于這個(gè)值因?yàn)榕c曲線是個(gè)“S”型結(jié)構(gòu)有關(guān)，所以結(jié)果是有過(guò)失的，是一種預(yù)算。再加上實(shí)驗(yàn)過(guò)失，所以達(dá)不到志向的效果。建議挑選試劑盒時(shí)，應(yīng)當(dāng)看曲線上*小的濃度值，而不是試劑盒上寫的靈敏度。
那么酶聯(lián)免疫試劑盒查看哪些規(guī)劃呢？確診試劑的查看規(guī)劃以ng/ml計(jì)。而多見的科研試劑盒中的樣本中的政策蛋白，規(guī)劃可隨樣本的類型而改變。所以實(shí)驗(yàn)前應(yīng)經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)和預(yù)實(shí)驗(yàn)的辦法判定樣本是不是在所購(gòu)的規(guī)劃內(nèi)，是很首要的進(jìn)程。
酶聯(lián)免疫試劑盒假設(shè)不在查看規(guī)劃內(nèi)，分兩種情況對(duì)待：
A、假設(shè)樣本中政策蛋白太低，需找相應(yīng)靈敏度更高的試劑盒來(lái)查看或濃縮樣本。
B、假設(shè)樣本中政策蛋白太高，則需求進(jìn)一步稀釋后進(jìn)行查看。
那么在ELISA法試驗(yàn)中如何提高靈敏度呢?具體的操作方法如下：
1、包被液稀釋的抗原（4、8、16、32、64、128ng/ml），用移液器小心將抗原液100μl加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可產(chǎn)生氣泡。每個(gè)濃度加4孔（4個(gè)復(fù)孔），對(duì)照孔4孔加入相同體積的包被液；其中兩孔加入100μl樣本。用保鮮膜包好酶標(biāo)板，將酶標(biāo)板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中，放入4℃中包被過(guò)夜。
2、洗滌：將酶標(biāo)板孔中的包被液傾干凈，并反扣在干凈的吸水紙上拍干，加入洗滌液洗滌進(jìn)行洗滌。采用浸泡式洗滌法，將洗滌液注滿板孔，放置3min，間歇搖動(dòng)，浸泡時(shí)間不隨意縮短，吸干孔內(nèi)洗滌液，也可甩去洗滌液，反扣在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌4次。
3、封閉：在酶標(biāo)板孔的底部加入封閉液200μl，室溫下封閉1h。
4、1h后將酶標(biāo)板孔中的封閉液傾倒干凈，并反扣在干凈的吸水紙上拍干，然后每孔中加入一抗使用液100μl，注意將抗體液加在酶標(biāo)板孔的底部，避免加在孔壁上部。用保鮮膜包好酶標(biāo)板，將酶標(biāo)板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中，并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯，在37℃溫箱中放置2h。
5、2h后取出酶標(biāo)板，傾倒干凈酶標(biāo)板孔中的一抗溶液，并反扣在干凈的吸水紙上拍干。洗滌4次，洗滌方法同2。
6、在酶標(biāo)板孔中加入梅標(biāo)二抗1:4000倍稀釋的溶液100μl，加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可產(chǎn)生氣泡。用保鮮膜包好酶標(biāo)板，將其放入底部墊有濕砂布的鋁盒中，并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯，在37℃溫箱中放置1h。
7、取出酶標(biāo)板，傾倒干凈孔中的二抗溶液，并反扣在干凈的吸水紙上拍干，按2洗滌方法洗滌4次。
8、在酶標(biāo)板每孔中加入底物A液50μl，底物B液50μl，反應(yīng)15min～20min后，在每孔中加入反應(yīng)中止液50μl，在中止反應(yīng)后15min時(shí)在酶標(biāo)儀上于450nm處測(cè)定OD值。