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恒遠(yuǎn)生物帶您徹底了解elisa試劑盒洗板問題及相關(guān)知識(shí)

點(diǎn)擊次數(shù):15260   發(fā)布時(shí)間:2016/12/27 9:17:39

    elisa試劑盒是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)都會(huì)影響試驗(yàn)的檢測(cè)質(zhì)量,而洗板也會(huì)影響到試驗(yàn)的質(zhì)量。

洗板可能碰到的問題有:
1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉;
2.采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不徹底;洗板針堵塞,抽吸不完全;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差;
3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。

相應(yīng)解決辦法有:
1.保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2.合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。

那么洗板的目的是什么?
   在于將特異性結(jié)合于固相上的抗原(抗體)與溫育過程中吸附的非特異性成份分離,使免疫復(fù)合物與待測(cè)抗體(抗原)呈一定比例,洗板是否合格直接影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。洗板應(yīng)嚴(yán)格按照說明控制洗板時(shí)間及洗板次數(shù),ELISA 檢測(cè)一般用洗滌液洗板3 次,洗滌液應(yīng)嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行稀釋, 洗液應(yīng)注滿每個(gè)微孔并注意洗液不外溢,垂直甩板避免交叉污染,防止出現(xiàn)假陰性及假陽性結(jié)果。使用洗板機(jī)洗板可一定程度上避免環(huán)境污染、提高工作效率,洗滌開始時(shí)注意觀察每根吸液針是否一直插入孔底并吸干孔內(nèi)全部液體, 嚴(yán)格按照要求設(shè)置一定的洗板時(shí)間及洗板次數(shù)。洗板過程中注意沖力大小,避免沖力過大導(dǎo)致酶結(jié)合物丟失,吸光度值偏低。洗液應(yīng)根據(jù)不同廠家的酶標(biāo)板調(diào)整注水量, 注意不要溢出孔外; 稀釋洗液所用的蒸餾水或去離子水酸堿度適中,使配出的洗液pH 在7.2~7.6 范圍內(nèi),用非金屬容器保存,保持液體新鮮無污染、沉淀。洗板結(jié)束后將板拍干,應(yīng)垂直扣在備好的干凈的吸水紙或毛巾上,且注意每次更新干凈的吸水紙或毛巾。

洗板時(shí)應(yīng)注意以下問題:
(1) 需每天校正注液量及殘液量, 洗滌后殘液量不得大于2μl;
(2)及時(shí)更換破損吸液針,避免破壞底板包被;
(3)針對(duì)不同廠家酶標(biāo)板注意調(diào)整吸液頭下降高度, 避免沖洗針頭卡住酶標(biāo)板;
(4)注意調(diào)整洗液量,洗液量過多將溢出,過少將達(dá)不到洗滌效果;
(5)關(guān)機(jī)前使用蒸餾水沖洗管道,避免洗液的結(jié)晶物堵塞管道;
(6)不同種試劑盒的洗液嚴(yán)禁混合使用。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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