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人胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）酶聯(lián)免疫分析

點擊次數(shù)：15558 發(fā)布時間：2012/3/9 9:12:57

人胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）酶聯(lián)免疫分析

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：人胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織或其它相關(guān)組織液中胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用夾心法測定標本中胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）水平。用純化的人胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）受體包被微孔板，往微孔中依次加入胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ），再與HRP標記的羊抗人受體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）抗原濃度。

試劑盒組成

1	20倍濃縮洗滌液	30ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶	8	標準品（240μg/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

標本要求

1．標本采集后盡早進行實驗。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

3．可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在、第二孔中分別加標準品100μl，然后在、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180μg/L，120μg/L ，60μg/L，30μg/L，15μg/L）。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．嚴格按照說明書操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

7．本試劑不同批號組分不得混用。底物請避光保存。

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．如與英文說明書有異，以英文說明書為準

檢測范圍：

10μg/L -200μg/L

規(guī)格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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