上海恒遠(yuǎn)秉承“信譽(yù)、質(zhì)量、品牌、誠信為本"的理念,以優(yōu)良的服務(wù)質(zhì)量和實惠的價格,
elisa試劑盒實驗前,請仔細(xì)閱讀中英文說明書,我們提供免費代測,實驗過程指導(dǎo)服務(wù)。在做ELISA實驗的時候加入顯色底物后,標(biāo)準(zhǔn)品有顏色,但結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)品點吸光值偏低或偏高、標(biāo)準(zhǔn)曲線無梯度等等,總結(jié)如下原因:
一、標(biāo)準(zhǔn)曲線點吸光值偏高,超出
儀器檢測范圍
ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線點的吸光值一般在3.0以下,若太高超出儀器檢測范圍,顯示OVER FLOW,可能原因:
1.可能原因:如OD絕對值靠譜,則顯色過度
1.解決方法:TMB顯色體系中建議根據(jù)S1,S2顏色進(jìn)行判斷,當(dāng)S1,S2深藍(lán)色,有明顯梯度,S5有淡藍(lán)色時即可終止。
2.可能原因:僅作單波長檢測
2.解決方法: 由于參考波長讀取非特異性檢測,如指紋、劃痕、水漬等,對結(jié)果也有影響。建議*終結(jié)果以雙波長為*準(zhǔn)確。
二、標(biāo)準(zhǔn)曲線點吸光值偏低
ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線點的吸光值一般要在0.8以上,若小于0.8,可能的原因:
1.可能原因:粉末標(biāo)準(zhǔn)品未充分溶解
1.解決方法:粉末標(biāo)準(zhǔn)品按說明書加一定體積的液體后,輕柔混勻,室溫靜置30分鐘,充分溶解。
2.可能原因:標(biāo)準(zhǔn)品反復(fù)凍融
2.解決方法:標(biāo)準(zhǔn)品反復(fù)凍融后活性降低。
3.可能原因:孵育溫度、時間
3.解決方法: 按說明書要求孵育條件進(jìn)行孵育。
4.可能原因:顯色時間控制
4.解決方法:TMB顯色體系中建議根據(jù)S1,S2顏色進(jìn)行判斷,當(dāng)S1,S2深藍(lán)色,有明顯梯度,S5有淡藍(lán)色時即可終止。
三、標(biāo)準(zhǔn)曲線無梯度
ELISA 實驗中標(biāo)準(zhǔn)品2倍倍比稀釋,但結(jié)果分析標(biāo)準(zhǔn)曲線沒有梯度,可能的原因:
1.可能原因: 樣品或標(biāo)準(zhǔn)品污染
1.解決方法: 避免污染
2.可能原因:錯誤的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋
2.解決方法: 完全按照說明書稀釋
3.可能原因: 偶聯(lián)抗體濃度過高
3.解決方法: 按照說明書調(diào)整到*佳的濃度
4.可能原因:TMB底物孵育時間過長
4.解決方法: 調(diào)整到合適的孵育時間
5.可能原因: 錯誤的孵育時間或溫度
5.解決方法:完全按照說明書
6.可能原因:孵育時未加蓋導(dǎo)致溶液揮發(fā)和污染
6.解決方法: 貼封片或加蓋
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