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技術(shù)文章

你知道如何計算引物的Tm值嗎?

點擊次數(shù)：15947 發(fā)布時間：2020/7/23 9:13:47

引物設(shè)計軟件都可以給出Tm，與引物長度、堿基組成、引物使用緩沖的離子強度有關(guān)。

長度為25mer以下的引物，Tm計算公式為：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)

對于更長的寡聚核苷酸，Tm計算公式為：

Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) - 600/size

公式中，Size = 引物長度。

Tm的定義：Tm = Temperature at which 50% of a given oligonucleotide is hybridized to its complementary strand. In the absence of destabilizing agents, like formamide or urea, Tm will depend on 3 major parameters: The sequence: a GC-rich sequence has a higher melting temperature. The strand concentration: high oligonucleotide concentrations favor hybrid formation, which results in a higher melting temperature. The salt concentration: high ionic strength results in a higher Tm as cations stabilize the DNA duplexes.

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