影響固體培養(yǎng)基滅菌效果的因素如下:
(1)培養(yǎng)基原材料預(yù)濕是否均勻在采用蒸汽滅菌時,是靠水蒸氣的溫度和穿透能力達到滅菌的。水分熱傳導(dǎo)性能比許多固體培養(yǎng)基(木屑、糞草等)的熱傳導(dǎo)性能好,如果培養(yǎng)基預(yù)濕適 度均勻,在滅菌過程中溫度傳遞較容易達到均勻;如果培養(yǎng)料預(yù)濕不透,僅在料面形成一層水膜,而蒸汽又不能穿透到培養(yǎng)料的 干燥處,那么就達不到滅菌的效果。因此在培養(yǎng)基配料過程 中塊狀培養(yǎng)基(木塊、種木、糞塊)應(yīng)搗碎,水分均勻浸透。
(2)培養(yǎng)基的酸堿度在培養(yǎng)基含有水的情況下,pH對培養(yǎng)基的滅菌效果有較大的影響。由于氫離子對細胞壁水解和對細 胞質(zhì)中堿基的親合作用,促成生理反應(yīng)加劇,加快細胞生命的停 止。因此,偏酸性的培養(yǎng)基可以比中性或微堿性的培養(yǎng)基滅菌時間短。
(3)培養(yǎng)基營養(yǎng)成分在培養(yǎng)基成分中,糖、脂肪和蛋白質(zhì) 的存在對微生物有一定的保護作用。特別是濃度較高的有機營養(yǎng)物質(zhì),當(dāng)其表面受熱變性后能形成一層保護膜影響熱的傳導(dǎo),從 而提高微生物的耐熱性。但這種耐熱性同濃度(即基質(zhì)中含水 量)有關(guān),相反,無機鹽、堿、酸等則可以削弱微生物的耐熱性,這同提高微生物細胞壁的導(dǎo)熱性能有關(guān)系。 作為培養(yǎng)食用菌的原料,通過滅菌既要達到無菌狀態(tài),又要保持營養(yǎng)成分少破壞。在滅菌過程中要處理好溫度、壓力和時間的關(guān)系,可以根據(jù)在高溫條件下微生物死亡比有機物破壞來得快的特性,提高滅菌溫度,縮短滅菌時間,達到既無菌又保護營養(yǎng)的目的。
(4)滅菌方式和滅菌鍋(灶)的容量食用菌制種、制袋生產(chǎn)中,培養(yǎng)料(基)滅菌可在高壓滅菌鍋、常壓滅菌鍋(灶)中 進行。常壓灶滅菌時間長,耗能大,但制作容易,技術(shù)和材料要求低。髙壓滅菌設(shè)備須按有關(guān)壓力容器要求選材和憑證制造檢驗,成本高,但滅菌時間短,效率高,比常壓滅菌。根據(jù)實踐經(jīng)驗,固定常壓滅菌灶每次滅菌以1 000〜2 000袋的容量為 宜,滅菌灶體積小,灶內(nèi)升溫快,培養(yǎng)基內(nèi)微生物可自繁時間短,培養(yǎng)基內(nèi)pH降低少,滅菌效果更有把握。高壓滅菌只要鍋爐蒸汽量與鍋倉體積相適應(yīng)即可,但蒸汽送氣口的擋氣板應(yīng)當(dāng)隨著進汽管口直徑的增大而增大,使蒸汽進人鍋內(nèi)大面積擴散,這 樣可減少菌瓶菌袋棉塞受潮,防止污染。
(5)滅菌鍋(灶)內(nèi)培養(yǎng)基的堆疊方式鍋內(nèi)菌瓶或菌袋排 列形式對滅菌效果影響大,因為塑料袋受熱后變軟,若采用堆柴片式堆疊,在加溫時菌袋之間可能緊貼形成一體,使直徑不足 10厘米的菌袋,變成直徑幾十厘米甚至更大的“菌袋”,導(dǎo)致熱 傳導(dǎo)由表到里的路程變遠,結(jié)果延長滅菌時間,影響滅菌效果。菌瓶由于外壁是堅硬的玻璃,瓶與瓶之間有間隙,以致蒸汽較易 使各瓶均勻受熱。如果把菌袋改為“井”字形排列,每3〜4層以層板相隔開后再往上架疊,這樣容易使蒸汽正常對流,鍋 (灶)內(nèi)溫度均勻,穿透培養(yǎng)基較容易,能取得較好的滅菌效果。有的栽培者為了達到突擊生產(chǎn)的目的,不顧鍋(灶)容量,柴片 式過量堆疊菌袋,其結(jié)果不僅滅菌時間拉長,而且效果也不理 想;顒邮綔缇睿莘e可達3 000〜5 000筒,周圍應(yīng)使用周轉(zhuǎn) 筐裝袋,中部用“井”字型排放。
(6)滅菌鍋(灶)內(nèi)的溫度與壓力高壓滅菌鍋衡量滅菌效果是通過壓力表和溫度計。濕熱蒸汽滅菌的香菇一種培養(yǎng)基, 要求1.08X105帕的壓力,木屑培養(yǎng)基要求1.47X 105帕的壓力, 這時鍋內(nèi)溫度在121〜126°C并維持時間1.5〜2小時。在實際操作中,經(jīng)常發(fā)現(xiàn)滅菌不過關(guān)的原因是冷空氣排除不干凈。排除冷空氣有兩種方法,一種是先關(guān)閉氣閥,當(dāng)壓力上升到4。 9X104 帕,再打開氣閥排除冷空氣。這種方法要注意棉塞用牛皮紙和棉線扎緊,防止排氣減壓時,棉塞沖出試管口或瓶口;二是從加溫開始就打開氣閥,當(dāng)氣閥出口蒸汽直立沖出、氣溫較高時才關(guān)閉閥門,進人滅菌狀態(tài)。常壓滅菌時無排氣問題,但要注意常壓滅菌灶結(jié)構(gòu)對氣流溫度的影響,方形灶內(nèi)一般靠近盛水鍋的4個邊角氣溫,在建灶時,沿著鍋沿把四個角落砌成圓形,以便灶內(nèi)均衡升溫,達到同步滅菌的目的。常壓滅菌溫度越高,滅菌所需時間越短。
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