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閱讀次數(shù):1679 發(fā)布時間:2012/9/10 9:01:42
昆蟲有一個開放的循環(huán)系統(tǒng),血液可以簡單地通過一個切口在身體墻。*方便的,你應(yīng)把一條腿讓血滴到冷的玻璃燒杯。以獲得的收益,這是必要的,排除血液注入緩沖進(jìn)入體腔。實驗過程是如下圖所示。
搬遷后的血細(xì)胞,溴化鉀添加到血形成44%個解決方案。這是分層與磷酸鹽緩沖液(公共廣播公司),并形成一個密度梯度離心。*終,所有的蛋白質(zhì)上浮或下沉的區(qū)域對應(yīng)的密度。有一個低密度脂蛋白,黃色漂浮高于non-lipoproteins,包括綠色cyanoprotein。分離蛋白是分離。對個人的分?jǐn)?shù),密度是由折射率,蛋白質(zhì)含量和組成的Brad ford法和電泳,分別,和脂質(zhì)成分可以分析薄層和氣相色譜法。
實驗議定書
•1天出血和離心。
•2天分餾,折射率和透析。
•3天凍干。
1天:出血和離心。
注意:你需要戴上手套,整個程序。
每一組需要10 - 15蝗蟲。
1。以2 - 5毫升的公共電視網(wǎng)在一個干凈的100毫升燒杯和添加25µ升200毫米磺酰氟
注意安全。劇毒的!
2。流血的蝗蟲持有所有的腿和翅膀斷一條腿靠近胸部(見圖片)。確保沒有昆蟲的唾液淌進(jìn)燒杯(已經(jīng)準(zhǔn)備好紙巾擦口水)。
3。輕輕注入幾百微升了通過部分皮下。
不要傷害腸道!。
4。沖洗血(黃因胡蘿卜素)仔細(xì)進(jìn)行擠壓胸腔部位輕輕。收集血液從10 - 12蝗蟲。
5。把流血蝗蟲在罐子里。當(dāng)他完成了出血,movet罐子的電冰箱。處理過的動物尸體在稍后的日期。
6。使血解決~ 15毫升與公共電視網(wǎng)。
7。添加8.9克溴化鉀晶體,輕輕地攪拌,用干凈的攪拌棒。
8。溶解部分轉(zhuǎn)移到50毫升量筒和添加更多(2 - 3毫升)公共廣播溶解溴化鉀和攪拌至溶解。游泳池這些解決方案,高達(dá)20毫升的攪拌進(jìn)一步在測量筒。
9。轉(zhuǎn)移到30毫升塑料注射器(由夾子)連接到18針針和毛細(xì)管(見圖片)。
10。讓血流進(jìn)熱密封的離心管。
11。另加20毫升的注射器進(jìn)入覆蓋的血。
12。又熱封口溫暖起來。
13。平衡樣本來自其他組;你必須精確!用分析天平、添加或刪除公共電視網(wǎng)或從管。如果液體是在脖子上,去除尖端組織。
14。將金屬帽的管,和密封的熱封口機(jī)。一旦上限達(dá)到管的肩膀,快速移動的權(quán)利和推管蓋與散熱片。
15。將四管積分50轉(zhuǎn)子的相對位置和地點,在超速離心機(jī)轉(zhuǎn)子。
16。確保蓋關(guān)閉。打開真空離心機(jī)。設(shè)置運(yùn)行的條件10℃,剎車,45000,時間4.5 h。
17。旋轉(zhuǎn)45000轉(zhuǎn)為4.5小時,和留樣一夜之間在離心機(jī)的。
2天:檢索樣本
(約2 - 3小時連續(xù))
1。運(yùn)行后結(jié)束,把真空,等到室壓力達(dá)到大氣壓力。現(xiàn)在您可以刪除管。
2。注意任何不尋常的觀察期間或之后,法離心(例如,泄漏),并記錄在離心機(jī)的書。清潔室和轉(zhuǎn)子,并開始排練避免凝結(jié)在離心機(jī)。
3。用一把鋒利的單刃剃刀仔細(xì)剪開離心管。
4。建立biorad餾分收集器。內(nèi)容為20毫升的組分分餾。
5。確定密度使用折射計。
6。同時測定紫外吸光度在280納米。記得使用uv-permeable塑料試管(1對)。
7。而確定的折射率發(fā)生2件透析管(每個約20厘米長)到500毫升的燒杯中充滿了區(qū)水。
8。離開一個整除(300µ升)每一部分標(biāo)記修改離心管透析。
9。透析對~ 1升區(qū)水在寒冷的房間,改變緩沖區(qū)的一次。
10。小心將整體攜脂組分(通常是3 - 5黃色分?jǐn)?shù))進(jìn)入透析管(關(guān)閉了在底部有一個橙色鉗)使用巴斯德吸管。
11。關(guān)閉透析管,確保留下足夠的擴(kuò)展空間,在透析。
12。透析對4升區(qū)水在寒冷房間里過夜。改變水和重復(fù)撥號
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