RT - PCR法不僅可以用來檢測特定基因也semi-quantitate水平。因此，一個可以比較轉(zhuǎn)錄水平在不同的樣品。這可以通過不同的方式。一是定量反轉(zhuǎn)錄水平從控制，看家基因（如肌動蛋白和）。（轉(zhuǎn)錄的看家基因被認為是受了幾乎所有的實驗條件。）另一種方法是添加一個引物特異性聚合酶鏈反應在反應外源性，模板。

量化對看家基因轉(zhuǎn)錄

該方法包括逆轉(zhuǎn)錄使用寡核苷酸引物和隨機引物。由此產(chǎn)生的基因從而代表兩個看家基因轉(zhuǎn)錄以及具體的成績單是量化。逆轉(zhuǎn)錄反應然后放大在一個對聚合酶鏈反應系列-一系列放大看家基因（用磷酸甘油醛脫氫酶，等等，特異性引物），和其他的特定基因的興趣（在不同的基因，利用基因特異性引物）。

不同的聚合酶鏈反應管內(nèi)的每一個系列的建立等，他們在不同的數(shù)額模板（金額逆轉(zhuǎn)錄反應產(chǎn)物[基因]）或進行聚合酶鏈反應擴增循環(huán)數(shù)不同。這是因為，聚合酶鏈反應擴增，雖然理論上對數(shù)，不太高或低數(shù)量擴增周期。對數(shù)和指數(shù)擴增通常只發(fā)生在中東的周期，這取決于濃度目標模板。比較因此可以只在這一階段。

聚合酶鏈反應后，同體積的反應產(chǎn)物的電泳瓊脂糖凝膠上（是在同一凝膠）。圖像的彩色脫氧核糖核酸（產(chǎn)物）然后獲得和分析的視覺比較或與計算機軟件（如圖像論文）。一個例子是如下，半定量的目視檢查是表達fut9基因在細胞系，lec12和lec29。

可以看出，1）兩個細胞系，指數(shù)擴增兩型和fut9發(fā)生在周期33 - 42。2）本型帶強度在這些周期表明幾乎相同水平的模板（基因）是用于什么細胞系。3）的fut9水平約6 - 9周期＇behind ＇ ＇ lec12比lec29。

注釋

1。應該做一個試點實驗，首先是要確保只有單一的，具體的產(chǎn)品獲得的引物，得到一個想法的一系列周期或逆轉(zhuǎn)錄反應稀釋使用。

2。一開始應該與等量的核糖核酸聚合酶反應。

3。所有的反應進行的同時，使用試劑，準備作為一個supermix減少任何變化。

4。產(chǎn)物應該是運行在同一凝膠，再減少任何變化。

5。當定量比較罕見的成績單，它可以更好地用于控制那些看家基因的轉(zhuǎn)錄本在一個較低的水平。例如，謄醛縮酶表示在一個較低的水平相比，基因。

6。當進行聚合酶鏈反應不同周期數(shù)，建立聚合酶鏈反應的反應，消除他們一點零一分在中東的擴展階段期間所需的聚合酶鏈反應循環(huán)數(shù)。然后放在水浴在65～75℃幾分鐘保證延伸完成。

7。當反應不同反應量（通常是一個系列的2或3倍稀釋），稀逆轉(zhuǎn)錄反應使用逆轉(zhuǎn)錄反應，沒有模板的不同反應的反應有相同數(shù)量的反應（但不同數(shù)量的基因）。這是必要的，因為成分比其他基因的逆轉(zhuǎn)錄反應（如逆轉(zhuǎn)錄，數(shù)碼地面電視，等）可以影響反應效率。

半定量使用外源性標準

一個可以有外源性標準（無論是核糖核酸或核酸），可以被放大使用相同的引物，擴增轉(zhuǎn)錄的興趣。本標準的目的是有相同的序列的轉(zhuǎn)錄興趣除了是40 - 50個核苷酸短或更長。不同數(shù)量的標準是用來在不同的聚合酶鏈反應的反應（如標準是一種核糖核酸，它是前加入逆轉(zhuǎn)錄步驟）和擴增相同數(shù)量的周期。外源性標準競爭與內(nèi)源性模板，因此，這個策略也被稱為競爭性RTP CR。

產(chǎn)品electophoresed和定量的軟件和一個標準的＇amount ＇ ＇與＇強度＇ ＇ ＇band繪制。

在這個例子中所示，產(chǎn)品1是從標準和2是由內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄。可以看出，數(shù)額標準加入的反應為5道大致等于轉(zhuǎn)錄量。

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